WB實驗,蛋白質(zhì)印跡又稱免疫印跡,是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。常用于鑒定某種蛋白,并能對蛋白進行定性和半定量分析。
實驗原理:一個基因表達(dá)結(jié)果是產(chǎn)生相應(yīng)的蛋白質(zhì)(或酶)。因此,檢測蛋白質(zhì)是測定基因表達(dá)的主要標(biāo)志,檢測蛋白質(zhì)的方法很多,除ELISA法外,也可用與檢測DNA和RNA相類似的吸印方法。
而樣本制備是WB實驗的開始也是重要的一步,它的操作雖然并不復(fù)雜,卻有很多需要注意的細(xì)節(jié)。
根據(jù)實驗需要的目標(biāo)蛋白的不同,大致可以分為三種:總蛋白、膜蛋白和核蛋白??偟鞍滋崛☆櫭剂x就是把組織或細(xì)胞內(nèi)所有的蛋白全都提取出來;膜蛋白、核蛋白提取簡單來說就是把細(xì)胞膜、細(xì)胞核上的蛋白質(zhì)提取出來。
不同部位的蛋白要能夠進行提取分離,需要用到不同的提取試劑,看起來十分麻煩。其中在應(yīng)用裂解液進行裂解的時候,除了釋放出目標(biāo)蛋白,也同時釋放出一些酶,這些酶可能會降解我們的目標(biāo)蛋白,所以需要對這部分酶進行降解。
WB實驗中添加合適的蛋白酶抑制劑(abs9161)或磷酸酶抑制劑(abs9162),全程低溫操作,提前預(yù)冷PBS(abs961)、裂解液甚至槍頭等,從收集細(xì)胞開始一直到煮樣的全過程都應(yīng)該盡可能的保持在冰上操作。