“隔壁的實驗室又發(fā)了3篇SCI文章,我們還在處理數(shù)據(jù),這幾家的試劑盒檢測數(shù)據(jù)怎么都不一樣?"小編每當(dāng)聽到這句話,每次感受都不同。對那些努力鉆研數(shù)據(jù)的學(xué)者、那些把青春獻給實驗室的研究生們表示深深的同情。那么,造成試劑盒檢測數(shù)據(jù)不一樣的原因,除了一些實驗操作、實驗環(huán)境等客觀因素外,還有試劑盒質(zhì)量參數(shù),如重復(fù)率、板內(nèi)差、板間差、線性稀釋、回收率等。但是,最重要的影響因素可能是作為檢測標(biāo)尺的標(biāo)準(zhǔn)品。所以,下面我們就揭曉影響不同ELISA試劑盒檢測數(shù)據(jù)的差異和關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)品的幾個疑惑。
不同的ELISA試劑盒如何進行校準(zhǔn)?
國際標(biāo)準(zhǔn)物進行校準(zhǔn)
目前,ELISA試劑盒校準(zhǔn)方法為應(yīng)用NIBSC/WHO推薦的標(biāo)準(zhǔn)品對試劑盒進行校準(zhǔn)。
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高質(zhì)量的原料進行校準(zhǔn)
ELISA試劑盒的檢測指標(biāo)種類可能遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于NIBSC/WHO推薦的標(biāo)準(zhǔn)品,有時需要依靠高質(zhì)量的ELISA試劑盒原料。目前,優(yōu)質(zhì)的進口原料(如重組蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)品)依然是生產(chǎn)高質(zhì)量ELISA試劑盒的前提條件之一,但是不同品牌的蛋白表達(dá)體系和質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)不同,可能會導(dǎo)致原料的性能不同,進而造成檢測數(shù)據(jù)的差異。
嚴(yán)謹(jǐn)?shù)纳飿颖具M行驗證
隨著國內(nèi)生物技術(shù)的發(fā)展,自主研發(fā)蛋白表達(dá)、抗體制備、ELISA試劑盒開發(fā)技術(shù)也在不斷進步。除了應(yīng)用NIBSC/WHO推薦的標(biāo)準(zhǔn)品對試劑盒進行校準(zhǔn)外,也可用一些暫無相關(guān)機構(gòu)認(rèn)可的生物樣本進行驗證,按照科學(xué)研究方法,對種屬、性別、生命周期階段、種類等因素劃分所得到的生物樣本進行驗證。
生物樣本驗證ELISA試劑盒的試驗數(shù)據(jù)
重組蛋白-ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品的選擇
目前,國內(nèi)外的雙抗夾心法ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品大多數(shù)屬于重組蛋白,競爭法ELISA標(biāo)準(zhǔn)品更多樣化,有可能為重組蛋白也可能為化學(xué)合成物質(zhì)。為什么天然蛋白不用于作為標(biāo)準(zhǔn)品?雙抗夾心法ELISA試劑盒選擇重組蛋白為標(biāo)準(zhǔn)品的主要原因:
第一,天然蛋白均存在于復(fù)雜的生物樣本中,大多數(shù)在細(xì)胞或組織中表達(dá)量可能較少,不能進行蛋白純化或者成本高昂,無法獲得大量的天然蛋白。
第二,ELISA試劑盒檢測基于抗體和抗原的特異性結(jié)合,在研究之初,通過重組蛋白進行免疫特定動物獲得特定的單克隆或者多克隆抗體,因此,抗體和免疫的抗原存在高親和力和高特異性。
第三,隨著蛋白表達(dá)技術(shù)的發(fā)展,重組蛋白和天然蛋白具有更高的相似度,特別是以酵母或細(xì)胞為代表的真核表達(dá)系統(tǒng)的發(fā)展,讓真核表達(dá)的重組蛋白具有更多的空間構(gòu)象和生物活性。
ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品如何使用?
如果ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品是重組蛋白,請?zhí)崆?0-30分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫(18-25℃),如果試劑盒需分多次使用,請僅取出本次實驗所需的酶標(biāo)板條和試劑,剩余板條和試劑需按照要求條件保存。
標(biāo)準(zhǔn)品工作液的配制:將標(biāo)準(zhǔn)品的凍干粉末盡量集中到西林瓶或離心管底部,加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,室溫水平靜置10分鐘,讓重組蛋白恢復(fù)其空間構(gòu)象,然后上下顛倒數(shù)次,待其充分溶解后,輕輕混勻,避免起泡,然后進行分裝和使用即可。
標(biāo)準(zhǔn)品的保存和棄用:如果1個月內(nèi)使用,ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品可以暫存于4℃;如果1個月以上不用,標(biāo)準(zhǔn)品必須保存于-20℃以下環(huán)境;已配制好的標(biāo)準(zhǔn)品工作液如有剩余液體請切記要棄用,標(biāo)準(zhǔn)品工作液一定要現(xiàn)配現(xiàn)用。
索萊寶ELISA試劑盒研發(fā)平臺