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丙酮酸脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)步驟

發(fā)布日期: 2021-07-08
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  丙酮酸脫氫酶是一種催化丙酮酸脫羧反應(yīng)的多酶復(fù)合體,有三種酶和六種輔助因子參與化學(xué)反應(yīng)。分別是丙酮酸脫氫酶,二氫硫辛酰胺轉(zhuǎn)乙酰酶,二氫硫辛酸脫氫酶。

  丙酮酸脫氫酶(PDH)是一種線粒體酶,可以催化丙酮酸鹽向乙酰輔酶A和CO2的轉(zhuǎn)化,同時(shí)還是聯(lián)系三羧酸(TCA) 和糖酵解的媒介。該酶受到磷酸化作用的抑制,可在脫磷酸作用下激活。PDH的突變還與丙酮酸脫氫酶的效率(產(chǎn)生乳酸和神經(jīng)機(jī)能障礙)和亞急性壞死性腦脊髓病有關(guān)。通過酶促分析,可以測(cè)定丙酮酸脫氫酶的活性,該反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生與所含的酶活性成正比的比色 (450 nm) 產(chǎn)物。一單位丙酮酸脫氫酶的定義為,37 ℃下,每分鐘生成 1.0 Μmol 的NADH 所需的酶量。

  丙酮酸脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒的測(cè)定步驟:

  1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至605nm,蒸餾水調(diào)零。

  2、每個(gè)樣本需要900μL工作液,按樣本數(shù)加取出一定量的工作液于37°C (哺乳動(dòng)物)或25°C (其他物種)中孵育5min。

  3、空白管:在1mL比色皿中加入900L工作液和50H水,混勻,立即記錄605nm處初始吸光值A(chǔ)1和1min后的吸光值A(chǔ)2,計(jì)算△A 空白=A1-A2。

  4、測(cè)定管:在1mL比色皿中加入900風(fēng)工作液和50H樣本,混勻,立即記錄605nm 處初始吸光值A(chǔ)3和1min后的吸光值A(chǔ)4,計(jì)算△A測(cè)定=A3-A4。

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