蛋白Marker試劑是一些純化好的蛋白混合物,通過(guò)與染料共價(jià)耦聯(lián),在電泳過(guò)程中或者轉(zhuǎn)膜時(shí)可以直接觀察到。預(yù)染蛋白分子量的出現(xiàn)方便了實(shí)驗(yàn),可以幫助我們?cè)陔娪緯r(shí)、電泳后以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測(cè)電泳情況和估計(jì)遷移率。
未染色的蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)是簡(jiǎn)單的,也是準(zhǔn)確的一種。由于沒(méi)有附帶染料分子或者是標(biāo)記分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,是準(zhǔn)確判斷蛋白大小必須的。未預(yù)染的蛋白Marker可分為寬分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)、高分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)以及低分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)。
1、寬分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn),如果從實(shí)驗(yàn)的整體考慮的,就選擇范圍盡量寬條帶分布比較均勻的,這樣容易判斷你的蛋白在哪個(gè)區(qū)間。不過(guò)蛋白Marker試劑的條帶越多,每次上樣量也就越費(fèi)。如果買的是大包裝,建議分裝成小體積使用,多次反復(fù)凍融不利于蛋白Marker的保存和繼續(xù)使用。
2、高分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn),通常在檢測(cè)大分子量蛋白經(jīng)常使用到高分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)。
3、低分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn),在一般的蛋白電泳當(dāng)中,更常用的是低蛋白標(biāo)準(zhǔn)分子量,除了有指示蛋白大小的作用以外,有時(shí)還可以用作粗略的定量。特別小的蛋白Marker試劑條帶如果要顯色好,一定要保證足夠的上樣量。
由于預(yù)染蛋白Marker是與染料共價(jià)耦聯(lián),所以在不同的緩沖條件下電泳時(shí)遷移特性可能會(huì)發(fā)生某些變化,可能導(dǎo)致一些偏差,所以不太適合定位蛋白。
不過(guò)多數(shù)情況下蛋白Marker試劑的條帶未必能和我們的目標(biāo)蛋白*一樣,我們得到的也不過(guò)是一種相對(duì)蛋白Marker指示的參考大小,都是需要Western來(lái)定性,所以如果不是要區(qū)分大小相近的條帶,預(yù)染Marker還是很好用的,而且也可以和未染色的蛋白標(biāo)準(zhǔn)一起使用。