蛋白Marker試劑是一些純化好的蛋白混合物,通過與染料共價耦聯(lián),在電泳過程中或者轉(zhuǎn)膜時可以直接觀察到。預染蛋白分子量的出現(xiàn)方便了實驗,可以幫助我們在電泳時、電泳后以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測電泳情況和估計遷移率。
在實驗中未染色的蛋白分子量標準是簡單,也是準確的一種。由于沒有附帶染料分子或者是標記分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,是準確判斷蛋白大小必須的。未預染的蛋白Marker可分為寬分子量蛋白標準、高分子量蛋白標準以及低分子量蛋白標準。
1、寬分子量蛋白標準
如果從實驗的整體考慮的,就選擇范圍盡量寬條帶分布比較均勻的,這樣容易判斷你的蛋白在哪個區(qū)間。不過蛋白marker條帶越多,每次上樣量也就越費。如果買的是大包裝,建議分裝成小體積使用,多次反復凍融不利于蛋白Marker試劑的保存和繼續(xù)使用。
2、高分子量蛋白標準
通常在檢測大分子量蛋白經(jīng)常使用到高分子量蛋白標準。
3、低分子量蛋白標準
在一般的蛋白電泳當中,更常用的是低蛋白標準分子量,除了有指示蛋白大小的作用以外,有時還可以用作粗略的定量。特別小的蛋白Marker試劑如果要顯色好,一定要保證足夠的上樣量。
由于蛋白Marker是與染料共價耦聯(lián),所以在不同的緩沖條件下電泳時遷移特性可能會發(fā)生某些變化,可能導致一些偏差,所以不太適合準確定位蛋白。不過多數(shù)情況下蛋白Marker的條帶未必能和我們的目標蛋白*一樣,得到的也不過是一種相對Marker指示的參考大小,都需要Western來定性,所以如果不是要區(qū)分大小相近的條帶,蛋白Marker試劑還是很好用的,而且也可以和未染色的蛋白標準一起使用。