PCR定量試劑盒是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針,對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤,實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過程,結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析,進(jìn)而對(duì)待測(cè)樣品模板進(jìn)行定量分析。
PCR定量試劑盒是從土壤農(nóng)桿菌CP4菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因,是轉(zhuǎn)基因植物研究中常用的一種篩選標(biāo)記基因,它具有下列特點(diǎn):
1、即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。
2、根據(jù)鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物和探針,能專一性地檢測(cè)出樣品中的鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒成分,但不能檢測(cè)其他非鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒成分。
3、提供陽性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4、一管式閉管操作,降低了交叉污染。
5、快速,整個(gè)檢測(cè)過程(按一個(gè)樣品計(jì))所需時(shí)間僅為2.0小時(shí)。
6、鈣試劑盒只能用于科研,足夠50次20uL體系的探針法熒光定量PCR。
其實(shí)PCR定量試劑盒在擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。開始時(shí),探針完整地結(jié)合在DNA任意一條單鏈上,報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收,檢測(cè)不到熒光信號(hào)。
PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。