溴化乙錠是一種高度靈敏的嵌入性熒光染色劑,為強(qiáng)致癌誘變劑,但價(jià)格便宜。它與DNA的結(jié)合幾乎沒(méi)有堿基序列特異性。在高離子強(qiáng)度的飽和溶液中,大約每2.5個(gè)堿基插入一個(gè)溴化乙錠分子。EB的這種特性使其成為一種核酸染料,常用于瓊脂糖凝膠電泳中的核酸染色。溴化乙錠在紫外區(qū)302nm和366nm處有吸收峰,在紫外光的照射下,溴化乙錠可被激發(fā)出橙紅色的熒光(590nm)。結(jié)合有DNA的溴化乙錠復(fù)合物的熒光強(qiáng)度要比沒(méi)有結(jié)合DNA的染料高出20-30倍,因此溴化乙錠可檢測(cè)到少10ng的DNA條帶,非常靈敏。
由Biotium公司研發(fā)推出的EB替代染料,染色效果和EB差不多,在紫外下不容易淬滅,可以用于膠回收。但價(jià)格較貴。
GelRed 和 GelGreen 是兩種集高靈敏、低毒性和超穩(wěn)定性于一身的熒光核酸凝膠染色試劑。其水溶染色劑通過(guò)美國(guó)環(huán)保局安全認(rèn)定,廢棄物可直接倒入下水道,而不會(huì)造成任何環(huán)境污染。其特點(diǎn)有:
1)高靈敏度:GelRed 和 GelGreen 是目前市場(chǎng)中靈敏的凝膠核酸染料之一;
2)穩(wěn)定性*:可以使用微波爐加熱,可以在室溫下保存;
3)更安全:艾姆斯氏試驗(yàn)結(jié)果表明,該染料的誘變性遠(yuǎn)小于溴化乙錠(EB);
4)廣泛的適應(yīng)性:適用于預(yù)制凝膠和凝膠電泳后染色;
5)染色過(guò)程簡(jiǎn)單:與EB一樣,在預(yù)制膠和電泳過(guò)程中不必?fù)?dān)心染料降解;而電泳后染色過(guò)程也只需30分鐘且無(wú)需脫色或沖洗;
6)對(duì) DNA 和 RNA 的遷移影響小:對(duì)核酸遷移的影響小于 SYBR Green I?;
7)與標(biāo)準(zhǔn)凝膠成像系統(tǒng)以及可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置兼容:使用 312nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)時(shí),GelRed 可以的替代EB;使用 254nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)或可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置時(shí),GelGreen 足以替代任意一種 SYB染料。但該染料會(huì)使小片段DNA遷移慢一些(與EB相比).
綠色熒光核酸染料對(duì)于大片段DNA的染色效果良好,但是在對(duì)于500bp以下的片段效果不是很好,還有一個(gè)很致命的弱點(diǎn)是它的熒光基團(tuán)在紫外燈下非常容易淬滅,一般5-10min條帶就會(huì)消失。另外綠色熒光核酸染料不適用于膠回收。
穩(wěn)定性差,也有毒性。它屬于花箐素類核酸染料,花箐類染料不是無(wú)毒的,而只是低毒的,電泳的是經(jīng)過(guò)修飾的,修飾有三種:1.加入鹵素或氰基。2.插入環(huán)羥基。3.加入穩(wěn)定劑。SYBR Green I是高靈敏的DNA熒光染料,適用于各種電泳分析,操作簡(jiǎn)單:無(wú)須脫色或沖洗。少可檢出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I 與dsDNA 結(jié)合熒光信號(hào)會(huì)增強(qiáng)800-1000倍,用SYBR Green I染色的凝膠樣品熒光信號(hào)強(qiáng),背景信號(hào)低。SYBR Green和SYBR Gold相對(duì)于EB的穩(wěn)定性要差很多。SYBR系列的染料也能進(jìn)入細(xì)胞染色線粒體以及核內(nèi)的DNA,從而產(chǎn)生危害。SYBR Green I已被證實(shí)在紫外光下將會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)誘變能力,使DNA或其他物質(zhì)發(fā)生突變。
染料 | 安全性 | 穩(wěn)定性 | 靈敏 | 優(yōu)點(diǎn) | 缺點(diǎn) |
EB | - | + | ++ | 廉 價(jià) | 強(qiáng)誘變劑 |
Gel Green | + | + | ++ | 安全 | 價(jià)格高 |
綠色熒光核酸染料 | - | - | + | 大片段染色良好 | 易淬滅 |
SYBR Green | - | - | ++ | 靈敏 | 穩(wěn)定性差 |
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