日韩午夜福利片段在线观看-成人国产精品户外在线野战-人妻人人澡人人添人人爽尤物-色吊丝中文在线免费看

歡迎光臨北京索萊寶科技有限公司網(wǎng)站!
銷(xiāo)售咨詢(xún)熱線:
17801761073
產(chǎn)品目錄
您的位置: 網(wǎng)站首頁(yè) > 技術(shù)文章 > DH5α感受態(tài)細(xì)胞

DH5α感受態(tài)細(xì)胞

發(fā)布日期: 2019-08-27
瀏覽人氣: 1132

DH5α感受態(tài)細(xì)胞  

品牌:Solarbio | 貨號(hào):C1100

本公司生產(chǎn)的DH5α感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝制備得到,可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè),轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108,-70℃保存3-5個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

基因型: supE44△lacU169(φ80 lacZ△M15)hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1

特   點(diǎn): 一種用于鋪制與培養(yǎng)質(zhì)粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其φ80 lacZ△M15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)β互補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選。

 

操作方法(以下操作均按無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行)

1、將感受態(tài)細(xì)胞置于冰上融化,以下實(shí)驗(yàn)以100ul感受態(tài)細(xì)胞為例。

2、向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入需轉(zhuǎn)化的目的DNA,注意目的DNA的體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸          液體積的十分之一,輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物,冰浴放置30分鐘。

3、將離心管置于42℃水浴中60-90秒,然后快速轉(zhuǎn)移到冰浴中放置2-3分鐘,注意不要搖動(dòng)離       心管。

4、向離心管中加入500ul無(wú)菌無(wú)抗的SOC或LB培養(yǎng)基,37℃ 180rpm振蕩培養(yǎng)1小時(shí)。目的是        使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),使菌體復(fù)蘇。

5、取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布含相應(yīng)抗生素的SOC或LB平板,37℃倒置培養(yǎng)12-16小            時(shí)。涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)整,如轉(zhuǎn)化的DNA總量較多,可取100ul左右的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物        涂板;反之,如轉(zhuǎn)化的DNA總量較少,可取200-300ul的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板。過(guò)多菌液可以抑          制細(xì)菌生長(zhǎng)。如果預(yù)計(jì)的克隆較少,可通過(guò)離心后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布        于一個(gè)平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少,可以將剩下的          菌液再涂布新的平板。

 

注意事項(xiàng):

      1、感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃,不可反復(fù)凍融,否則其轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低。

      2、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌操作,防止其它DNA或雜菌的污染,避免為以后的篩選、鑒定帶來(lái)影響。

      3、轉(zhuǎn)化時(shí),轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比,但當(dāng)加入的外源DNA量過(guò)多或體積過(guò)大反而會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時(shí)DNA體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。

     4、轉(zhuǎn)化率的計(jì)算:轉(zhuǎn)化率=產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量。

     5、為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功,可以保留部分連接產(chǎn)物,以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到低。

分享到:
亚洲国产精品肉丝袜久久| 麻豆在线观看一区二区| 欧美日韩国产自拍亚洲| 国产老熟女超碰一区二区三区| 午夜精品国产一区在线观看| 深夜福利亚洲高清性感| 久久国产亚洲精品赲碰热| 美女激情免费在线观看| 日韩欧美中文字幕av| 婷婷色香五月综合激激情| 热久久这里只有精品视频| 日本午夜免费福利视频| 国产原创中文av在线播放 | 日本高清视频在线观看不卡| 亚洲高清一区二区高清| 日本人妻的诱惑在线观看| 日本三区不卡高清更新二区| 久久免费精品拍拍一区二区| 午夜精品国产精品久久久| 黄色美女日本的美女日人| 欧美成人黄色一级视频| 欧美午夜性刺激在线观看| 国产精品一区二区视频大全| 99久久精品午夜一区| 日韩无套内射免费精品| 国产精品午夜一区二区三区| 一二区不卡不卡在线观看| 国产又大又猛又粗又长又爽| 高清亚洲精品中文字幕乱码| 综合久综合久综合久久| 日韩国产亚洲欧美激情| 亚洲熟女熟妇乱色一区| 人妻内射精品一区二区| 99香蕉精品视频国产版| 国产又大又硬又粗又黄| 欧美精品激情视频一区| 日韩精品一区二区亚洲| 日韩精品一级片免费看| 欧美激情床戏一区二区三| 国产一区二区精品丝袜| 九九热视频经典在线观看|