品牌:Solarbio | 貨號:BC3710
儲存條件 | -20℃,避光,有效期少1年 |
---|---|
單位 | 盒 |
全蛋白提取試劑盒(強(qiáng))用于哺乳動物組織和細(xì)胞中提取總蛋白,試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑,作用較為強(qiáng)烈,可快速獲得總蛋白,可用于免疫印跡實驗等基礎(chǔ)研究實驗,由于含有上述的酶抑制劑,不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品僅用于科研。
產(chǎn)品組成:
操作方法:
1、組織總蛋白的提取
在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF;混勻,放置在冰上備用;
稱取0.1g的新鮮組織,放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處,用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎,然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液,研磨直沒有明顯的組織塊,這個過程注意冰上操作;將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中,4 攝氏度 12000g離心30min;吸取上清新的管中;進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實驗。
(提取好的蛋白建議保存于-80 oC,即用即取,避免反復(fù)凍融,避免長時間儲存。)
2、細(xì)胞總蛋白的提取
裂解液的用量:107個細(xì)胞需要裂解液1ml;
貼壁細(xì)胞:棄去培養(yǎng)基,用冷的PBS洗兩次,棄去PBS,然后加入計算好的細(xì)胞裂解液;在冰上用細(xì)胞刮刀進(jìn)行刮離細(xì)胞,將刮離的細(xì)胞裂解液移入EP管中,顛倒裂解20-30min
懸浮細(xì)胞:4 oC 400g離心收集細(xì)胞,用冷的PBS洗兩次細(xì)胞,同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液,
渦旋10s,放置冰上裂解10min,重復(fù)3-4次;裂解完畢之后,將細(xì)胞裂解液4 oC 12000g離心30min;將上清移入新的EP管中;進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實驗。(提取好的蛋白建議保存于-80 oC,即用即取,避免反復(fù)凍融,避免長時間儲存。)
注意事項:
實驗過程,所有試劑都要需要預(yù)冷或者即融,保證操作過程中的低溫環(huán)境;
PSMF(有毒)現(xiàn)用現(xiàn)加,因為PMSF在水溶液中會快速降解;