試劑盒提取植物dna已經(jīng)獲得廣泛應用。各個生化試劑廠家也都有了dna提取試劑盒產(chǎn)品。索萊寶作為國內(nèi)生化試劑供應商提供了各類dna提取試劑盒。今天給大家介紹試劑盒提取植物dna步驟。當然是以索萊寶產(chǎn)植物基因組dna提取試劑盒產(chǎn)品為例。
使用前先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
1、植物組織預處理:取新鮮植物組織(不超過 100mg)或干重組織(不超過 20mg),于液氮中充分研磨細粉狀,讓液氮自然揮發(fā)。
2、將研磨好的植物組織粉末迅速轉移到預先裝有 400ul 溶液 A、20ul RNase A(10mg/ml)和 5ul β-巰基乙醇的離心管中,充分顛倒混勻,室溫放置 10min。
3、加入 140ul 溶液 B,充分顛倒混勻,12000rpm 離心 10min,將上清轉移新離心管(約 400-500ul),注意不要吸入沉淀。
4、加入和上清相同體積的溶液 C,充分顛倒混勻,再加入和溶液 C 相同體積的無水乙醇,此時若出現(xiàn)絮狀物,將絮狀物吹散后一起加入吸附柱中,12000rpm 離心 5min,棄廢液,一次加不完可分兩次加入。
注意:如果吸附柱膜呈綠色或離心時有堵塞現(xiàn)象,可向吸附柱中加入 600ul 無水乙醇,并適當延長離心時間。
5、 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(請先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm 離心 1min,棄廢液,將吸附柱放回收集管。
6、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液,12000rpm 離心 1min,棄廢液,將吸附柱放回收集管中, 12000rpm 離心 2min。
7、將吸附柱置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘,否則殘余的乙醇可能會影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR 等。
8、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經(jīng) 65℃水浴預熱的洗脫液,室溫放置1-5min,12000rpm 離心 2min,即可得到高質(zhì)量的植物基因組 DNA。
9、(可選)離心所得洗脫液再加入吸附柱中,室溫放置 2min,12000rpm 離心 2min。
以上是索萊寶植物基因組dna提取試劑盒使用步驟。如果還有不理解可以索萊寶部分獲取幫助。